一、培训概述
本培训面向从事斑马鱼基因功能研究的科研人员及技术人员（仅限科研院所），提供CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）全流程的手把手实操教学。培训采用1-3 人精品小班形式，确保每位学员获得充分指导与实际操作经验。
培训分为两种班型：
- 5 天全流程班：学员跟做一次完整敲除流程（从 gRNA 制备到测序分析）。
- 7 天强化班：在跟做一次的基础上，增加第二次独立操作（包括独立设计 gRNA、独立注射、独立鉴定），强化关键技能。
培训所用基因（基因 A、基因 B）由培训方提供，均为已验证可敲除、无胚胎致死的斑马鱼基因。学员可自备基因，需额外支付费用及遵守相关条款。
二、培训安排对比
| 项目 | 5 天全流程班 | 7 天强化班 |
|---|---|---|
| 培训天数 | 5 天 | 7 天 |
| 培训形式 | 学员跟做一次全流程 | 跟做一次 + 独立操作一次 |
| 总注射胚胎数 | ≥500 枚（其中独立练习≥200 枚） | ≥700 枚（基因 A≥300 枚，基因 B≥200 枚，独立练习≥200 枚） |
| gRNA 制备次数 | 1 次（跟做） | 2 次（跟做 1 次 + 独立 1 次） |
| 独立设计 gRNA | 无 | 有（基因 B） |
| 独立注射 | 仅练习（非靶向 gRNA） | 独立注射基因 B（≥200 枚） |
| 独立鉴定 | 无 | 独立完成基因 B 的全部分析 |
注意：价格不含学员食宿、差旅。
三、每日详细日程
5 天全流程班
| 天数 | 内容 |
|---|---|
| 第 1 天 | sgRNA 制备（基因 A）：靶点设计、转录模板制备、体外转录、纯化、电泳质检 |
| 第 2 天 | 全天显微注射： ・上午：基因 A 注射（≥300 枚，学员跟做） ・下午：独立胚胎练习显微注射（≥200 枚，使用非靶向 gRNA，讲师指导） （含胚胎预处理、注射体系配制、拉针开针、体积校准） |
| 第 3 天 | 养殖与鉴定基础： ・斑马鱼养殖基础（雌雄分辨、鱼卵培养、死卵剔除、换水） ・注射后胚胎护理 ・阳性鱼鉴定方式培训（PCR 引物设计、测序原理、杂合 / 纯合判定） |
| 第 4 天 | 基因 A 样品处理： ・上午：基因 A 胚胎 48hpf 提取 DNA + F1 剪尾演示（预制样本） ・下午：PCR 扩增、电泳 |
| 第 5 天 | 测序分析与总结：基因 A PCR 产物纯化、送测序、测序峰图解读、全流程总结 |
7 天强化班
| 天数 | 内容 |
|---|---|
| 第 1 天 | sgRNA 制备（基因 A）：与 5 天班第 1 天完全相同（跟做） |
| 第 2 天 | 基因 A 注射 + 基因 B 设计： ・上午：基因 A 显微注射（≥300 枚，学员跟做） ・下午：独立设计基因 B 的 sgRNA（电脑操作，讲师指导完成靶点设计） |
| 第 3 天 | 养殖、鉴定基础及基因 B 制备： ・斑马鱼养殖基础（雌雄分辨、鱼卵培养、死卵剔除、换水） ・注射后胚胎护理 ・阳性鱼鉴定方式培训 ・基因 B：gRNA 体外转录、纯化、质检（学员独立操作，穿插进行） |
| 第 4 天 | 基因 B 注射 + 基因 A 提取： ・上午：基因 B 显微注射（≥200 枚，学员独立操作，含全套注射流程） ・下午：基因 A 胚胎 48hpf 提取 DNA + F1 剪尾演示（预制样本） （基因 A 的 PCR 扩增可下午或次日进行） |
| 第 5 天 | 基因 A 分析 + 基因 B 护理： ・基因 A：PCR 电泳、纯化、送测序、测序峰图解读 ・基因 B：24hpf 观察 + 护理，准备次日提取试剂 |
| 第 6 天 | 基因 B 独立鉴定： ・基因 B 胚胎 48hpf 提取 DNA（学员独立） ・PCR 扩增、电泳、纯化、送测序 |
| 第 7 天 | 总结与答疑： ・基因 B 测序结果判读 ・两次实验数据对比分析 ・全流程答疑 |
四、自备基因说明
学员可要求使用自己提供的基因位点替换培训方提供的基因 A 和/或基因 B。
流程与费用
- 提交时间：需提前 2 周提交基因序列及靶点信息。
- 评估与告知：培训方进行可行性评估，并向学员告知预期敲除效率（高 / 中 / 低 / 无法敲除）。
- 学员选择：
・ 若接受预期效率，则按自备基因开展培训，并支付加价费用 20,000 元 / 基因。
・ 若不接受预期效率，培训方将全额退还该基因对应的加价费用，并改为使用培训方提供的基因 A 或基因 B（不另收费）。 - 拒绝权利：对于预期效率极低或无法敲除的基因，培训方有权拒绝使用，并全额退款。
费用汇总
| 班型 | 标准价（使用培训方基因） | 自备基因附加费（每个） |
|---|---|---|
| 5 天全流程班 | 28,000 - 32,000 元 / 人 | +20,000 元 |
| 7 天强化班 | 42,000 - 50,000 元 / 人 | +20,000 元 |
若学员同时替换基因 A 和基因 B，需支付 40,000 元附加费。每个基因独立评估，可分别接受或拒绝。
五、团购优惠政策
同一单位或课题组同时报名同一期培训，按以下标准享受团购价：
| 班型 | 单人标准价（元 / 人） | 2 人团购价（元 / 人） | 3 人团购价（元 / 人） |
|---|---|---|---|
| 5 天全流程班 | 28,000 - 32,000 | 26,000 - 30,000 | 24,000 - 28,000 |
| 7 天强化班 | 42,000 - 50,000 | 39,000 - 47,000 | 36,000 - 44,000 |
团购注意事项
- 同一单位 / 课题组：需由同一负责人统一报名、统一付款。
- 同一期培训：团购成员需参加同一期培训（时间、地点相同）。
- 自备基因附加费：若团购学员中有人选择自备基因，加价部分（20,000 元 / 基因）不参与团购折扣，按原价单独收取。
- 退费规则：若团购中部分学员取消报名，剩余学员不再享受团购价，需按单人标准价补足差价。
六、费用包含与不含
费用包含
- 培训期间所有试剂耗材（包括 Cas9 蛋白、gRNA 合成试剂、PCR 试剂、测序服务等）。
- 培训用斑马鱼胚胎、预制 F1 成鱼样本、养殖系统使用。
费用不含
- 学员往返培训地点的交通、住宿、餐饮。
- 学员个人消费。
七、报名与付款
- 每期人数：1-3 人，按报名顺序安排。
- 付款方式：开课前 30 天支付 50% 定金，开课前 7 天付清余款。
- 取消政策：如因学员原因取消培训，定金不退；可协商顺延至下一期。
八、售后支持
培训结束后 2 个月内，学员可通过线上方式就实验问题向讲师咨询，讲师承诺 24 小时内回复。
